技術(shù)文章
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生成胰島素的胰島細(xì)胞可“再生”
2010-04-07研究發(fā)現(xiàn)生成胰島素的胰島細(xì)胞可“再生”一個(gè)研究小組日前發(fā)現(xiàn)，一旦胰腺中生成胰島素的胰島β細(xì)胞全被破壞，那么胰腺中就會有其他細(xì)胞出來“救急”，“變身”為胰島β細(xì)胞。這一發(fā)現(xiàn)表明，胰島β細(xì)胞可以“再生”，這也許有助于醫(yī)學(xué)專家重新設(shè)計(jì)對糖尿病的療法。一般而言，胰腺中的胰島α細(xì)胞負(fù)責(zé)制造胰高血糖素，胰島β細(xì)胞負(fù)責(zé)制造胰島素。但日本奈良科學(xué)技術(shù)大學(xué)院大學(xué)和瑞士日內(nèi)瓦大...
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科學(xué)家成功繪出中日韓人種基因變異圖譜
2010-04-07科學(xué)家成功繪出中日韓人種基因變異圖譜該圖譜可有效適用于亞洲人的診療據(jù)韓聯(lián)社4月5日報(bào)道，韓國首爾大學(xué)基因醫(yī)學(xué)研究所（GMI-SNU）徐廷瑄教授領(lǐng)導(dǎo)的研究小組宣稱，他們通過對30名中國人、韓國人和日本人的基因組研究，成功繪制出中日韓人種超高清“基因拷貝數(shù)變異（CNV）”圖譜，并根據(jù)該圖譜發(fā)現(xiàn)，亞洲人*的基因拷貝數(shù)變異共有3500多個(gè)。科學(xué)家們展望，該信息將為對...
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細(xì)胞培養(yǎng)的緩沖體系
2010-04-06細(xì)胞培養(yǎng)的緩沖體系用于細(xì)胞培養(yǎng)的緩沖鹽溶液主要分為兩種類型：一種是在大氣條件下用于平衡的緩沖鹽溶液，另一種是當(dāng)氣相中含有5-10%的二氧化碳時(shí)用于平衡的緩沖鹽溶液。由于含有Hank緩沖鹽的培養(yǎng)基的磷酸pKa值近于生理pH值，因此適于大氣條件下的平衡。這些培養(yǎng)基含有適于羧化作用和類似生物過程的碳酸氫根離子。在二氧化碳培養(yǎng)箱中使用Hank緩沖鹽會導(dǎo)致培養(yǎng)基的pH...
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點(diǎn)突變的相關(guān)基因型
2010-03-29點(diǎn)突變相關(guān)的基因型mutS（Mutator）功能：mutS基因表達(dá)的蛋白具有識別DNA上錯(cuò)配序列的功能，并能修復(fù)其錯(cuò)配序列（GC→AT），防止基因突變。mutS基因的變異導(dǎo)致DNA的錯(cuò)配序列不能得到修復(fù)，容易發(fā)生基因突變，這對于利用點(diǎn)突變進(jìn)行基因改造是有利的。dut（dUTPase）功能：dut基因表達(dá)脫氧尿嘧啶三磷酸核苷酸水解酶（dUTPase），它能水解...
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甲基化相關(guān)的基因型
2010-03-29甲基化相關(guān)的基因型dam（DNAadeninemethylase）功能：dam基因表達(dá)DNA腺嘌呤甲基化酶，它能催化特異序列GATC中A的甲基化，保證DNA免受限制性核酸內(nèi)切酶MboI的切斷，同時(shí)在DNA復(fù)制時(shí)也起一定的輔助作用。dam基因的變異導(dǎo)致腺嘌呤（A）甲基化酶活性的缺失，使腺嘌呤（A）不被甲基化，易于獲得非甲基化質(zhì)粒。dcm（DNAcytosine...
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基因重組相關(guān)的基因型
2010-03-29基因重組相關(guān)的基因型recA（Recombination）功能：recA基因表達(dá)ATP依賴型DNA重組酶，它在λ噬菌體與基因組DNA的溶原重組時(shí)起作用，同時(shí)具有對DNA放射性損傷的修復(fù)功能。由recA基因的變異所產(chǎn)生的基因型使同源或異源DNA的重組不能進(jìn)行，保持插入DNA的穩(wěn)定性，對DNA的轉(zhuǎn)化有利。一個(gè)菌株的基因型如果是recA，則說明此菌株的表現(xiàn)型是重組...
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Northern blot技術(shù)
2010-03-24Northernblot技術(shù)經(jīng)乙二醛和二甲基亞砜變性處理后進(jìn)行的RNA電泳這一方法原于McMaster和Carmichael（1977）。含有乙二醛－DMSO的凝膠比含有甲醛的凝膠更難于進(jìn)行電泳，因?yàn)榍罢哂緞铀俾瘦^慢而且需將電泳液時(shí)行循環(huán)以避免電泳過程中形成過高的H＋梯度。盡管上述兩種凝膠具有近乎相等的分辨率（Miller，1987），但用含朋乙二醛－DMS...
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植物組織RNA提取
2010-03-24植物組織RNA提取的難點(diǎn)及對策從植物組織中提取RNA是進(jìn)行植物分子生物學(xué)方面研究的必要前提。要進(jìn)行Northern雜交分析，純化mRNA以用于體外翻譯或建立cDNA文庫，RT-PCR及差示分析等分子生物學(xué)研究，都需要高質(zhì)量的RNA。因此，從植物組織中提取純度高、完整性好的RNA是順利進(jìn)行上述研究的關(guān)鍵所在。a）*Y（WL從文獻(xiàn)報(bào)道上看，有許多植物就是由于未能...
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復(fù)蘇方法
2010-03-15復(fù)蘇方法1．從液氮罐中取出安剖；有時(shí)因安剖未封嚴(yán)，浸入了液氮，取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸，因此應(yīng)帶有防護(hù)眼睛和手套。2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上蓋并不時(shí)搖動，盡快解凍。3．剪開紗布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，凈化臺上打開蓋，用吸管吸出細(xì)胞懸液，裝入離心管中，再補(bǔ)加10ml培養(yǎng)液，吹打使細(xì)胞懸浮。4．低速離心（500～...
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蛋白質(zhì)提取的方法
2010-03-15蛋白質(zhì)提取的方法總匯1、植物組織蛋白質(zhì)提取方法1、根據(jù)樣品重量（1g樣品加入3.5ml提取液，可根據(jù)材料不同適當(dāng)加入），準(zhǔn)備提取液放在冰上。2、把樣品放在研缽中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上靜置（3-4小時(shí)）。3、用離心機(jī)離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，樣品制備完成。蛋白質(zhì)提取液：300ml1、1Mtri...
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幾種常用轉(zhuǎn)化細(xì)胞的轉(zhuǎn)化
2010-03-15幾種常用轉(zhuǎn)化細(xì)胞和轉(zhuǎn)化技術(shù)1）致癌化學(xué)物轉(zhuǎn)化細(xì)胞：轉(zhuǎn)化敘利亞地鼠胚胎細(xì)胞實(shí)驗(yàn)1．取材：妊娠后第13天取材，取數(shù)個(gè)同窩胚胎，去頭和內(nèi)臟，在無菌條件下剪碎至米粒大小，再用0.25％胰蛋白酶（含0.01％EDTA）37℃消化30分鐘，濾過、低速離心、吸除消化液、加入營養(yǎng)液、制備成細(xì)胞懸液、接種入75cm/培養(yǎng)瓶中，接種密度10～20×106/75cm，37℃培養(yǎng)2...
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如何提高RT-PCR反應(yīng)體系的靈敏度
2010-03-10如何提高RT-PCR反應(yīng)體系的靈敏度：1、分離高質(zhì)量RNA成功的cDNA合成來自高質(zhì)量的RNA。高質(zhì)量的RNA應(yīng)保證全長并且不含逆轉(zhuǎn)錄酶的抑制劑如EDTA或SDS等，以及盡可能減少基因組DNA污染。RNA的質(zhì)量決定了你能夠轉(zhuǎn)錄到cDNA上的序列信息量的大值。2、使用無RNaseH活性的逆轉(zhuǎn)錄酶在逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中經(jīng)常加入RNase抑制劑以增加cDNA合成的長度和產(chǎn)...
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影響質(zhì)粒提取的因素
2010-03-08影響質(zhì)粒提取的因素：質(zhì)粒提取的得率和質(zhì)量與很多因素有關(guān)，如宿主菌的種類和培養(yǎng)條件、細(xì)胞的裂解、質(zhì)?？截悢?shù)、質(zhì)粒的穩(wěn)定性、抗生素、吸附柱的吸附量等。宿主菌種類質(zhì)粒主要存在于細(xì)菌、放線菌和真菌細(xì)胞中，多數(shù)情況下我們是從大腸桿菌中提取質(zhì)粒。大腸桿菌的菌株不同會影響質(zhì)粒提取的質(zhì)量。從宿主菌如DH5α和*0中可以得到高質(zhì)量的質(zhì)粒DNA。HBl01和它的衍生菌株，如TG...
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質(zhì)粒提取原理及流程
2010-03-08質(zhì)粒提取原理及流程：較常用的質(zhì)粒DNA提取方法有3種：堿裂解法、煮沸法和去污劑（如Triton和SDS）裂解法。前兩種方法比較劇烈，適用于較小的質(zhì)粒（15kb）。堿裂解法是一種應(yīng)用為廣泛的制備質(zhì)粒DNA的方法，其原理為：染色體DNA比質(zhì)粒DNA分子大得多，且染色體DNA為線狀分子，而質(zhì)粒DNA為共價(jià)閉合環(huán)狀分子；當(dāng)用堿處理DNA溶液時(shí)，線狀染色體DNA容易發(fā)...
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質(zhì)粒DNA分離和純化
2010-03-08質(zhì)粒DNA分離和純化：純化要求質(zhì)粒DNA中不應(yīng)存在對后續(xù)實(shí)驗(yàn)中的酶活性有抑制作用的有機(jī)溶劑分子或過高濃度的金屬離子。避免其它生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖、脂類、基因組和RNA的污染。不同的后續(xù)實(shí)驗(yàn)對于質(zhì)粒純度的要求不同，常規(guī)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)（如酶切、測序等）普通純度的質(zhì)粒即可滿足實(shí)驗(yàn)，而對于轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，要求質(zhì)粒的純度較高（如高純度或無內(nèi)毒素）。可以選擇不同的質(zhì)粒提...